在做細胞研究中幾乎離不開牛血清,選購和使用牛血清往往對于實驗的順利開展起到了關鍵的作用,但不少研究者對于牛血清還有不少疑問和誤區。四季青作為從事牛血清生產和開發30余年的企業,談談我們對于牛血清應該如何使用和選購的見解,希望對您的實驗有所幫助。
如何選擇血清級別?
一般來說級別越高的血清對于細胞培養越有利,但價格相應的也越貴。在實驗經費有限的情況下,全部使用最高級別的進口血清,有時候并不十分必要,反而降低了其他試劑、耗材的品質,增加了實驗整體的風險。
因此四季青小助理建議您根據細胞的種類和血清試用結果選擇相應的血清級別,一般來講,級別稍低的血清對于特定細胞的培養效果不一定比高級別的血清差,具體培養效果還是得看試用結果。
如果是干細胞、原代細胞等各種血清依賴度高的細胞及其他各類對血清質量有較高要求的實驗研究,建議使用優質的胎牛血清來進行培養;
如果是對血清質量要求相對一般、增殖能力很強的細胞實驗,采用品質合格的普通胎牛血清、類標準胎牛血清或新生牛血清也是可以的。
血清怎么保存和解凍?
四季青小助理建議您收到血清后根據外包裝說明,通常保存在-10~-30℃溫度條件下,可保存五年。使用時將血清從冷凍箱取出后,置于2~8℃冰箱使之緩慢融解,一般過夜融解。若化凍后置于2~8℃環境中建議在兩周內使用完。如果一次無法用完整瓶血清,可以根據使用情況將血清分裝至多個無菌的容器中,冷凍保存,但在凍入低溫冰箱前,必須留有一定空間,防止血清冰凍后體積增加導致容器破裂。直接購買小容量的免分裝血清則是更保險的選擇。
更換血清要注意什么?
更換血清時不要以為用的是同一品牌,同一貨號的血清就可以萬事大吉,血清由于是天然產物,批與批之間不可避免會存在差異,因此四季青小助理建議您在更換血清時先進行少量試用確保使用該批次的血清沒有問題。在替換時采用逐步替換的方式,將新舊批次血清分別配制成培養基,按一定比例混合,待細胞適應后,完成新批號的替換。
條件允許的情況下最好一次性備足實驗使用量的血清,避免因為頻繁更換血清帶來的風險和提升實驗結果的穩定性。
血清到底要不要滅活?
血清熱滅活主要目的是去除血清中的補體,但熱滅活血清對大多數的細胞而言是不需要的,熱滅活反而會使血清中沉淀增多。因此四季青小助理建議非特殊細胞就不需要進行熱滅活了。
若確定您的細胞類型需要進行熱滅活,那么請將化凍后的血清置于 56℃水浴中滅活30分鐘,并通過搖晃使其受熱均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多,甚至導致血清無法正常使用。
我的細胞怎么染菌了?
當發現培養的細胞有輕微染菌現象的時候先不要馬上丟棄,因為有的時候并不是真正的染菌,而可能是由于熱處理,配置時pH變化等原因導致的蛋白和無機鹽持續析出,讓研究人員誤以為細胞被污染了。一般情況下沉淀并不會影響細胞的正常生長。
四季青小助理建議您在使用血清的時候,注意正確的血清解凍步驟,并盡量避免滅活血清及長時間的將血清置于高溫環境中。
欲去除這些沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以1000轉/分~2000轉/分稍微離心,上清液即可直接加入培養基內使用。
若經過辨別細胞確實被污染了,那么應該對可能涉及的原因進行排查,對環境進行徹底消毒,相關器具、試劑、培養基停止使用,重新配制試劑培養基,對相關操作人員進行培訓,然后重新復蘇細胞。防止污染的二次發生。
如何選擇血清品牌?
血清市場魚龍混雜,有部分雜牌血清假冒進口血清,使用的原料存在著很大的疑問,用這些雜牌血清不僅價格不低,用于培養細胞還有風險。因此四季青小助理建議您盡量選擇有長期穩定口碑的血清品牌,以保證實驗的順利進行。
正規公司出廠的牛血清都需要經過嚴格的多重質檢和驗證,除了細胞培養效果外還必須通過細菌、真菌、支原體、噬菌體、多種病毒以及各種性能測試,為科研人員提供保障。因此四季青小助理提醒您在選擇血清品牌時同時也要關注該品牌是否具備牛血清生產的資質,以及牛血清的相關質量合格證明。
如何辨別假貨?
由于牛血清造假比較容易,且不容易辨別,市場上流通著大量牛血清的假貨,這些假貨往往集中在一些售價高,比較好賣的進口知名品牌。若我們科研人員一旦買到了假貨,會嚴重影響實驗結果和進度。
為了盡可能避免買到假貨血清,四季青小助理建議您選擇有官方授權或確認可靠的經銷商處采購血清,能很大程度降低買到假貨的概率,條件允許的情況下從官方直接采購是最穩妥的選擇。